二級抗體用來偵測或增強一級抗體與目標抗原結合時所生的效應。被二級抗體結合辨認的一級抗體多數是單株抗體，通常不帶任何標記。相對地，二級抗體則幾乎都是多株類型，經常為了各種實驗目的，採接合上像是酵素、螢光發色團或生物素等化學接合物的方式供應。有賴於二級抗體扮演轉換器的角色，一級抗體與抗原之間物理性的結合作用得以轉換成發光信號並同時放大，故而使該結合作用能進一步被各類目的用途的儀器加以處理；繼而多樣化及深化抗體試劑的用途。

 

secondary antibody

 

 

 

來源物種

來源物種代表我們用以產生抗體的動物物種通常我們會建議二級抗體和一級抗體必須使用不同的來源物種，例如：若使用小鼠生產的一級抗體，二級抗體就必須是辨識來自小鼠的抗體，因此抗體可產自兔子或山羊。

 

secondary antibodyCitation:Janeway's Immunobiology, 9th Ed Chapter 5: The Generation of Lymphocyte Antigen Receptors

 

 

 

抗體分類

免疫球蛋白(抗體的學術名稱，兩詞常可互相替換)是一異質四聚體的球形分子，係由兩對藉雙硫鍵聯接的重鍊與輕鍊所構成。在胎生哺乳動物中，免疫球蛋白的重鏈部份根據序列可區分為IgM (μ)、IgD (δ)、IgG (γ)、IgA (α)、IgE (ε)等五種亞型，於不同的物種有時更存在「次亞型」，例如人類的的IgG有四種次亞型：IgG1 (γ1)、IgG2 (γ2)、IgG3 (γ3)與IgG4 (γ4)，小鼠的IgG有IgG1 (γ1)、IgG2a (γ2a)、IgG2b (γ2b)、IgG3 (γ3)等次亞型。輕鏈部份則可分為κ和λ兩種亞型。除了以序列為區分的亞型，根據蛋白質的結構功能，抗體亦能區分為：抗原結合區和可結晶區兩個區塊。

 

一般而言一級抗體多為IgG抗體，而多株的IgG二級抗體通常可辨認到所有亞型的重鏈及輕鏈，故二級抗體使用可辨認宿主IgG抗體即可；或者也可以根據一級抗體的亞型使用特定亞型的二級抗體。例如：一級抗體為小鼠 IgG2a 抗體時，可使用抗小鼠IgG或抗小鼠IgG2a的二級抗體。

 

 

交叉吸附

因為免疫球蛋白之間的相似度較高，所以不同物種間的二抗可能會有交叉反應，針對此類的問題，可以使用交叉吸附處理過的抗體，將二級抗體與不同物種或不同蛋白之固定化配體樹酯反應，可以降低交互反應。
在超過一種抗體同時染色以及組織染色時，交叉吸附的二級抗體就是一個必要的工具。

 

 

接合物

二級抗體可以接合許多不同的接合物，例如酶 (horseradish peroxidase (HRP), alkaline phosphatase (AP))、螢光物質 (FITC, PE, FAM, TAMRA, TRITC)或生物素，根據不同的應用選擇不同的接合物。

 

螢光物質：主要可以用於免疫螢光染色及流式細胞儀分析，根據儀器不同的激發光及濾片選擇最適當的螢光物質，不同的螢光物質對於其激發光及散射光的波長都不同，偉喬提供散射光為405、450、488、594、680的螢光物質可供選擇。

 

 

 

Anti-Mouse IgG

Anti-Rabbit IgG

Anti-Rat IgG

Anti-Human IgG/IgM

Anti-Goat IgG

Anti-Chicken IgY

Anti-Sheep IgG

HRP

V

V

 V V V V  V 
FAM

V

V

 V    V  V  V 
TAMRA

V

 V  V    V  V  V 
iFluor 405 V  V  V         
mFluor 450 V  V           
iFluor 488 V  V  V         
iFluor 594 V  V  V         
iFluor 680  V  V           

 

 

 

我們的抗體產品如何被純化?

二級抗體存在於收集自受免疫的動物血清中，接著以Protein A或Protein G樹脂膠體粒填充的親和力色譜管柱進行純化。應客戶的要求，經初步純化的抗體可以再行精製，吸收減少非專一性的或呈現交聯反應性的結合物、或者以免疫使用的目標抗原富集，或其他指定的品質提升步驟。

 

 

二級抗體產品

 

 

Back